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離心機應用一直強調的是什么?

發布時間:2021-12-20 15:7:55??????點擊:

  離心機應用一直強調的是——應根據實驗目的和實驗需要選擇合適的離心機。

  高速,低速,迷你還是大容量,都是要根據自身實驗來選擇得。

  比如常見的質粒DNA的分離、純化研究就需要離心機,而且不同的實驗方式離心機種類還不一樣。

  詳細講解如下:

  一、細菌的培養和收集

  將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基(含50ug/ml Amp)中, 37C培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50ug/ml Amp)中,37°C振蕩培養約12小時至對數生長后期。

  二、質粒DNA少量快速提取

  質粒DNA小量提取法對于從大星轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大星試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。

  (—)、煮沸法:

  1、將1.5ml培養液倒入離心管中,4C下12000 g微量離心機離心30秒。2、棄上清,將管倒置于衛生紙上幾分鐘,使液體流盡。

  3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中,渦旋混勻。

  4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml),渦旋振蕩3秒鐘。5、將離心管放入沸水浴中,50秒后立即取出。

  6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。

  7、用無菌牙簽從離心管中去除細菌碎片。8、取20ml進行電泳檢查。

  [注意]1.對大腸桿菌可從固體培養基上挑取單個菌落直接進行煮沸法提取質粒DNA.

  ⒉煮沸法中添加溶菌酶有─定限度,濃度高時,細菌裂解效果反而不好。有時不同溶菌酶也能溶菌。

  3.提取的質粒DNA中會含有RNA,但RNA并不干擾進一步實驗,如限制性內切酶消化,亞克隆及連接反應等。

  (二)少量DNA純化系統

  的少量DNA純化系統可快速有效的抽提質粒DNA,整個過程只需15分鐘。提取的質粒可直接用于DNA測序、酶切分析體外轉錄等。

  該系統中所含試劑和柱子可以用于50次1-3ml質粒培養液的分離和純化,試劑包括10ml細胞懸浮液,10ml細胞裂解液;10ml中和液,50ml/izard少量DNA純化樹脂,50ml柱洗液(使用前加95%乙醇至120ml )和50支微型柱。

  1、1-3ml過夜培養細胞液4C下12000g臺式高數離心機離心1-2分鐘。

  2、去除上清液,菌體細胞懸浮于200ul細胞懸浮液中,充分混合,并移入離心管中。3、加200ul細胞裂解液,顛倒離心管數次,直到溶液變清亮。

  4、加200ul中和液,顛倒離心管數次。

  5、4℃下12000g離心5分鐘,取上清液于新的離心管中。6、加1ml 少量DNA純化樹脂,顛倒離心管數次以充分混勻。

  7、取一次性注射器,取出注塞,并使注射筒與微型柱連接,用移液槍將上述混合液加入注射筒中;,并用注塞輕推,使混合物進入微型柱。8、將注射器與微型柱分開,取出注塞,再將注射簡與微型柱相連;加入2ml柱洗液,并用注塞輕推,使柱洗液進入微型柱。

  9、取出微型柱置于離心管中,離心2分鐘以除去微型柱中的柱洗液。

  10、將微型柱放在一個新離心管中,加50pulTE(或水)于微型柱中,靜止1分鐘后,4℃下12000g臺式高數離心機離心20秒。11、丟棄微型柱,將離心管中的質粒DNA貯于4℃或-20°℃冰箱。

  以上就是關于離心機在不同質粒DNA分離、純化研究中選擇不同的講解,所以在選購離心機的時候,要多跟離心機廠家溝通,購買合適自己的離心機,以免造成資源浪費


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